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液相色譜儀操作

更新日期: 2016-08-26
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 液相色譜儀(HPLC)現已成為有機化學(xué)分析的重要手段之一。同樣,在食品分析中,無(wú)論是殘留分析還是成分分析,HPLC也已成為*的分析儀器。和其它分析儀器一樣,你若想讓HPLC很好地為你工作、得到可靠的數據,首先你要保養好它,使它處于一個(gè)良好的待機狀態(tài),這樣你操作它進(jìn)行分析時(shí)就可以比較順利地獲得理想的結果。而且良好規范的操作習慣可以延長(cháng)儀器使用壽命。大家在學(xué)校或接受儀器公司培訓的時(shí)候,老師或工程師會(huì )提出很多的操作注意事項。但要是總結歸納一下,重要的有三點(diǎn):脫氣、過(guò)濾和沖洗。本文圍繞這三點(diǎn)進(jìn)行討論,給新從事HPLC分析的工作者一點(diǎn)操作建議,希望能對正確的操作儀器有一點(diǎn)幫助。更歡迎有經(jīng)驗的專(zhuān)家介紹使用經(jīng)驗,提出好建議。

一、脫氣

    流動(dòng)相脫氣對于避免HPLC系統出問(wèn)題,順利得到一個(gè)理想的數據是一個(gè)很有效的措施。HPLC系統內是不希望有氣泡存在的。HPLC泵在輸送液體時(shí)要產(chǎn)生很大的力量,由于氣體的壓縮比與液體相比大的多,因而當氣泡存在時(shí),你將觀(guān)察到瞬間的流速降低和系統壓力下降。如果這個(gè)氣泡足夠大,液相泵將不能輸送任何溶劑,而且如果壓力低于預先設定的壓力低限,泵將停止工作。有些泵設計可以很好地排除氣泡,而也有一些泵設計當氣泡存在時(shí)將停止運轉。
    當一個(gè)氣泡通過(guò)輸液泵時(shí),由于系統壓力大,氣泡通常會(huì )溶解在流動(dòng)相溶液中,隨流動(dòng)相通過(guò)柱子。但是到達檢測器流通池時(shí)系統壓力又恢復到了大氣壓,因而氣泡可能在檢測器流通池中又顯現,在色譜圖上會(huì )出現不規律的毛刺。為解決這個(gè)問(wèn)題,有些儀器公司設計一個(gè)反壓控制器,這樣可以在檢測器出口提供足夠的壓力保持氣泡始終溶解在流動(dòng)相中直到它們流出檢測器。當然,這個(gè)壓力不能超過(guò)流通池所能承受的壓力極限,否則可能損壞檢測器。
    紫外/可見(jiàn)光(UV/VIS)檢測器的液相色譜圖中的噪音毛刺通常是氣泡進(jìn)入并通過(guò)流通池的征兆。有些檢測器對空氣的存在也非常敏感,但表現出的征兆與UV/VIS不同,例如有報導說(shuō),當使用熒光(FL)檢測器時(shí),流動(dòng)相中溶解氧的存在可能會(huì )使一些化合物失去熒光性。此外,對于利用待測物質(zhì)在電極表面發(fā)生氧化還原反應引起電流變化而進(jìn)行檢測的電化學(xué)(EC)檢測器,對流動(dòng)相中的溶解氧的存在也非常靈敏。此外,氣泡的存在有時(shí)還會(huì )導致保留時(shí)間不重現。
    所以,必須注意消除流動(dòng)相中的空氣,并且還應避免空氣由管路(如PTFE管)滲透進(jìn)流動(dòng)相中。
    如果適當地關(guān)注在使用之前脫去流動(dòng)相中溶解進(jìn)的空氣,上述這些問(wèn)題均能避免,或把影響降至低。常用的脫氣方法有如下幾種:
1. 吹氦脫氣法。利用氦氣在液體中溶解度比空氣低的特性,在0.1MPa壓力下,以約60 mL/min流速通入流動(dòng)相儲液容器中10~15min,可以很有效地從流動(dòng)相中排除溶解的空氣,能排除接近80%的氧氣。采用一個(gè)分布式噴射流裝置,一體積的氦氣可從流動(dòng)相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著(zhù)1L氦氣通過(guò)1L流動(dòng)相就可完成排氣這個(gè)工作。這種脫氣方法雖然好,但我們國內氦氣價(jià)格較高,很少有實(shí)驗室采用此方法。
2. 加熱回流法。此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率,否則溶劑會(huì )丟失,混合流動(dòng)相的比例會(huì )有變化。
3. 抽真空脫氣法。此法可使用真空泵,降壓至0.05~0.07MPa即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì )使混合溶劑組成發(fā)生變化,從而影響到實(shí)驗的重現性,因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。
4. 超聲波脫氣法。將欲脫氣的流動(dòng)相置于超聲波清洗器中,用超聲波震蕩10~20min。此法的脫氣效果差。
5. 在線(xiàn)脫氣法。現在商品的HPLC儀器,均可配在線(xiàn)脫氣機。在線(xiàn)脫氣使用簡(jiǎn)單,低故障,有效。建議購買(mǎi)儀器時(shí)一定要購買(mǎi),有的公司是作為選購件,所以與儀器公司談配置時(shí)應與公司確認。

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